本キットの有効期間は製造日より18ヵ月間です。なお、使用期限はキットの外箱に表示してあります。必ず2～8℃で保存してください。

4回までの分割使用が可能です。残りの構成試薬は密閉して2～8℃で保存してください。（分割使用の場合は、プレートシールは必要分を切り取り使用してください。）

抗体プレート以外は、同一ロットの構成試薬をプールして使用することが可能ですが、ロットの異なるキットを組み合わせて使用することはできません。

必ず各構成試薬を22～28℃に戻してから使用してください。

マウス及びラット血清や脂肪細胞抽出液あるいは培養上清中のアディポネクチンが測定可能です。なお、標準品にはリコンビナントマウスアディポネクチンを使用しているため、ラットの測定値はマウスアディポネクチン当量として算出されます。

標準品（8.0～0.25ng/mL、0ng/mL）および、未処理検体（マウス、ラット血清、培養上清*を各々1例）、希釈検体（マウス血清10201倍希釈、ラット血清及び培養上清1111倍希釈を各々1例）を用いて5回までの凍結融解を繰り返したとき、測定値に影響は認められませんでした。

必ず凍結保存(-70℃以下が望ましい)してください

未処理検体及び希釈検体共に冷蔵（4℃）で7日まで測定への影響は認められませんでしたが、できる限り凍結保存してください。

未処理検体及び希釈検体共に室温（25℃）で8時間まで測定への影響は認められませんでしたが、できる限り凍結保存してください。

前処理後、検体希釈液でさらに希釈後測定してください。検体中のアディポネクチン濃度は、実測値に希釈倍率を乗じて算出してください。

22℃～28℃でほぼ同じ測定結果が得られます。

標準曲線は、横軸に標準液の濃度を、縦軸に実質吸光度（各検体の吸光度から0ng/mLの吸光度を差し引いた値）をプロットし、両対数変換の二次回帰等を当てはめることにより作成します。

0.25～8.0ng/mLのアディポネクチンを測定することが可能です。また自社施設における最小検出限界は15.6pg/mLでしたので、必要に応じ標準液の希釈系列を延長し、低濃度領域を正確に測定することも可能です。

同時再現性試験として4種類の管理試料を同時に8回測定した時の変動係数（CV）は10％未満でした。また測定間再現性試験として同じ試料を6回繰り返して測定した時の変動係数（CV）は15％未満でした。さらに４名の異なる測定者により測定者間再現性試験を行ったとき、変動係数（CV）は10％未満でした。

以下のように良好な結果を得ています。

4種類の検体を検体希釈液によって測定範囲内に収まるように希釈し、さらに2倍、4倍、8倍、16倍希釈後測定した結果、以下に示すように良好な希釈結果が得られました。

交差反応性を示さない動物検体

下記動物血清を1111倍希釈した後、本キットを用いて測定した結果、何れの血清も測定範囲下限（0.25ng/mL）未満であることを確認しました。

交差反応性を示した動物検体

ヒトおよびイヌ血清を表中に示す希釈率で測定した結果、血清中アディポネクチンを検出できることを確認しました。しかしながら本キットの標準品には、リコンビナントマウスアディポネクチンを使用しているため、それぞれの測定値はマウスアディポネクチン当量として算出されます。よって、本キットで得られるヒト血清の測定値は、ヒトアディポネクチンELISAキットの測定値とは異なります。

マウス／ラットアディポネクチンの免疫抗原は、大腸菌で作成したリコンビナント蛋白を用いています。リコンビナント蛋白は、マウスの全長アディポネクチンで分子量は約27kDです。

マウス血中、および培養細胞におけるマウスアディポネクチンの存在様式が論文にて報告されています。
HEK細胞および3T3-L1細胞の培養上清中には、6量体と3量体の存在が確認されており、さらに高分子の多量体を形成している可能性もあります。同様に、マウス血清中においても6量体および3量体が確認されており、さらに高分子に多量体を形成している可能性があります。

ご参考までに弊社での培養条件は以下のとおりです。